纳米特异性结构剖析 l 对缺失轻链的适应

第29位替换成两个细胞核就会基因突变高热点可以将CDR1从VHs当中的31-35位肽键扩大到VHHs当中的27-35位肽键。这种CDR1向N前端的扩展意味著引致第35位碱基肽键在抑止原的关系缘合当中的功用不太突出有。在VHH当中第35位碱基肽键意味著在CDR1应在向和联接两个β-翻转更为加关键性，G35的短时间内显现赞同这一论点。

“中心地带区”由编辑器当中的碱基肽键应在义，这些碱基肽键最相比之下抑止原的关系缘合。第 35位和第95位碱基肽键举例来说被并不认为是正因如此免疫接球倍受体当中“中心地带区”当中关键性的碱基肽键。这些碱基肽键举例来说与抑止原的关系缘合有关，因此像D95这样的水岸性高的肽键丰度较高。Gly，Tyr和Ser肽键也经常显现在第95位，这些肽键意味著是VH和VL相互间过渡到异质裂隙的情况。在美洲驼VHH当中，第95位碱基肽键也是层面可变的，但显然由带电的水岸性碱基肽键%主导地位。这再次断定，虽然不那么特别是在，但这也是对于VHH对纠正VL采取行动有的详虑到。

都只，举例来说在VH和VHH当中第93位碱基为丙氨酸Ala。然而，在VHH当中，该方位也有24%的碱基为天冬酰胺Asn。虽然该启动子的基因突变不如其他启动子那么特别是在，但这也使得VHH更为加水岸。

第47位和第103位两个色氨酸Trp肽键在 VH 和 VL 相互间的功用当中更为加关键性。如表1上平面图，W47在所有VHH 当中仅有被替换，并被并不认为是大象重链免疫接球倍受体的标记。而W103在VHH当中层面极端，所%比例高95.8%。 这断定两个色氨酸Trp肽键的机能全然各有不同。W47基因突变对上升VHH沉淀性很关键性，W103在VHH扮演着缺失的功用，意味著对VHH正确翻转和内核稳应在有关系。

在VH改建工程为VHH过程当中，推断出V37F基因突变；也VH高热稳应在有直接影响。Dies和Riechmann还并不认为；也VH的FR2基因突变，就会直接影响稳应在性和强调存量。在一系列独立的物理当中，获得的远比之下，FR2的基因突变(设于“以前”VH-VL功用编辑器)对稳应在性和强调存量有直接影响。

表1 VHs和VHHs当中在(以前)VH-VL编辑器碱基肽键产于

2.3、基因突变上升VHH稳应在性在生理以前提条件下（PBS buffer）完成噬菌体文库筛选，选择辨认Malasezzia furfar（Malf1）细胞就会内层倍受体的VHHs。然而，这些VHHs的应用需要在高浓度的肥皂当中发挥功用。所获得VHHs被推论在低浓度的肥皂当中不能与Malf1的关系缘合。然而在有肥皂buffer的只能完成筛选，获得的VHHs很难在肥皂当中与Malf1的关系缘合，断定这些VHHs的稳应在性大大上升。对这些VHHs的序列分析推断出，“以前”VH-VL功用编辑器的肽键带有一些在VHHs当中不经常显现的基因突变。

碱基肽键Q/E44是被并不认为是VHHs的标记的四个肽键之一，与大多数VHs当中的G44远比，不属于缺失替换。在选择辨认Malasezzia furfar（Malf1）细胞就会内层倍受体的VHHs时，推断出几个的关系缘合良好的VHHs假定R44基因突变。基因突变Q44R引致VHHs在肥皂当中的稳应在性上升，而R44Q则特别是在降低VHHs在肥皂当中的稳应在性。此外，R44K并不直接影响在VHHs在肥皂当中的的关系缘合，但是当pH值为11时，VHHs在肥皂当中的的关系缘合能力减强于，因为K44的加成层面高。这断定，带负电的R44对VHHs在肥皂当中的稳应在性较强促进功用，电荷在VHH的这个周边地区很关键性。

2.4、沉淀度与稳应在性

VHH1被推论很难在人体内和体内减缓流行性感冒，为了大幅提高当中和流行性感冒的VHH的倍受体质沉淀稳应在性，完成了基因突变筛选，。基因基因突变R27A推测出有对胰倍受体核糖体的稳应在性上升，高热稳应在性上升，产存量层面上升，亲和力保持未变。

另外两个基因基因突变是在“以前”VH-VL功用编辑器上所致了的。第一个基因基因突变R45A未乏善可陈出有特别是在转变，其对胰倍受体核糖体敏感性不倍受直接影响，亲和力不倍受直接影响，强调层面并不大攀升，高热稳应在性并不大攀升。这断定尽管R45的保存率较高，达到97%（见表1），但某些基因突变意味著对VHH稳应在性不必所致了特别是在的直接影响。

碱基K43方位的基因突变，也是层面极端的，%86%，其实对稳应在性所致了了巨大的直接影响。虽然T43假定于所有VHHs当中的4%，但由于细胞就会内的积累，K43T引致生产层面更为加低。所致了这种基因基因突变的酵母细胞就会的细胞就会内大多在详巴德亮蓝染色的凝胶上其实推测出有VHH的积累，然而，这种大多不能被纯化，意味著是由于聚集。这断定增生倍受到严重阻碍，这意味著是由不也就是说的翻转所致的。

平面图1 H14、R2和2个基因基因突变的Northern；还有。左至右是RNA凝胶电泳平面图；在右方的到处是也就是说的Northern；还有；底部是量测算和相对电导率。

平面图1推测，与野生型H14远比，基因基因突变H14M（K43T和E44R）的mRNA强调存量攀升了三倍，与野生型R2的mRNA层面远比，基因基因突变R2M（K43T和E44R）攀升了两倍多。作为对照物理，测应在了针对Malf1的VHHs的mRNA层面。四个VHHs，两个带有T43R44（D12和A7M），两个带有T43Q44（D12M和A7），推测的mRNA数存量大体上相等（见平面图2）。这断定所继续做的基因突变不就会引起mRNA的大大不稳应在。

平面图2 D12、A7和2个基因基因突变的Northern；还有。左至右是RNA凝胶电泳平面图；在右方的到处是也就是说的Northern；还有；底部是量测算和相对电导率。

尽管H14M和R2M的mRNA不稳应在，但少存量的基因基因突变VHH倍受体可以被纯化，并在肥皂当中次测试其稳应在性。但这些基因突变并不就会引致VHH-R2和VHH-H14在肥皂当中的的关系缘合力上升。，虽然这些肽键已被推论对肥皂当中的稳应在性很关键性，但它们并不是这种稳应在性的唯一决应在因素。

由于mRNA的适用被推论对mRNA的稳应在性有直接影响，意味著是mRNA的适用对这些基因基因突变不是最佳的。malf-D12适用的mRNA是ACC（T），CGG（R），而H14M和R2M适用的mRNA是ACG（T）和CGG（R）。因此，R44的mRNA的适用不意味著全然引致mRNA的不稳应在，尽管这个mRNA是在酿酒酵母当中最不常用的ArgmRNA（1.7/1000）。在酿酒酵母当中，Thr的mRNA适用存量为ACT（20.2）、ACA（17.7）、ACC（12.6）和ACG（8.0）。H14M和R2M的mRNA适用情况与malf-D12的mRNA适用情况远比，在酿酒酵母当中的生产情况不那么完美。这意味著是对mRNA稳应在性攀升的一个概述。然而，mRNA的稳应在性很比较简单，这意味著不是不稳应在的唯一情况。 为上升倍受体脱水稳应在性而重构的抑止流行性感冒VHH1的基因基因突变K43T，也推测出有倍受体生产层面的大大攀升。为了排除在H14和R2的基因基因突变当中想到的mRNA稳应在性的攀升引致产存量攀升，我们测应在了mRNA的强调层面。平面图3推测了为降低胰倍受体核糖体敏感性的基因突变筛选而所致了的八个基因基因突变的Northern；还有。 平面图3推测基因基因突变K43T的mRNA不就会特别是在攀升。这断定增生倍受到直接影响是由于倍受体质层面的疑虑，并进一步赞同这一基因突变引致翻转疑虑的论点。

平面图3 VHH1基因基因突变的Northern；还有。左至右是RNA凝胶电泳平面图；在右方的到处是也就是说的Northern；还有；底部是量测算和相对电导率。

✎ 3. 小 缘

VH-VL编辑器电磁力的肽键是层面极端的。这些肽键举例来说是VH当中大的、异质的和醇类的肽键，较强与VL电磁力和过渡到的关系缘合裂隙的类似于机能。如果不就会任何进一步的物理论证，人们意味著很短时间地并不认为，在欠缺VL的VHHs当中，这些肽键的关键性性高，精确性也高。然而VHHs当中的这些肽键较强更为高的可变性，这些肽键的关键性性乏善可陈在通过将异质肽键取而代之成更为水岸和常带电荷的肽键。

异质肽键到水岸肽键替换的一个类似于例外是W103。这个大醇类水分子和更为加异质性的肽键在96%的VHHs当中也可以想到。这意味着W103在VHHs当中的功用与 "以前 "VH-VL编辑器当中的其他肽键各有不同。

从VH到VHH辨别到的取而代之特别是在上升了水岸性。在这里，我们为 "以前 "VH-VL编辑器当中的肽键的更为相当多的机能提供了证据这些肽键，特别是水岸的KEREF/L扩展大多的肽键是决应在VHHs稳应在性的关键因素。对肽键产于的研究者推测，该周边地区的替代率最高。此外，第43、44和（在较小层面上）第45位的基因突变对稳应在性有极大的直接影响。这断定，这些肽键在VHHs的稳应在性当中较强关键功用。

????文献来源：

Dolk, Edward, et al. "Comparison of VH and VHH domains on sequence level; adaptations of the VHH to the lack of VL."

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