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细胞培养/换液/传代/冻存/复苏操纵说明

发布时间：2025-09-23

细胞。将肝细胞按比例或数量分装至冷存管中的。一般冷存密度为(1.0~2.0)×106个/mL。

特别注意: 肝细胞长时间在非培育出条件下放置会严重影响肝细胞的精神状态。如离心后用冷存液重悬计算，代为将肝细胞放置于4℃微波炉内，以减弱肝细胞激素，较好的保持肝细胞精神状态。

4. 如适用海胆一步冷存液，冷存管实际上竖直装入-80℃微波炉即可完成“一步”冷存。如适用程序冷存液，需要将冷存管装入延后预冷的程序解冻盒后装入-80℃微波炉。

5. 24小时后可将冷存管移到到冷藏进行依然复原。

特别注意: 肝细胞不可依然复原在-80℃微波炉中的。建议24 h后决定移到至冷藏中的。

| 肝细胞消退

所需要路易斯酸

肝细胞基本上培育出基

★ 推荐适用海胆有机体肝细胞配套配有培育出基

1. 开启37℃水浴锅。加压基本上培育出基，延后将肝细胞从冷藏中的取出，摆放在-80℃微波炉，让冷存管中的冷藏汽化。

2. 不洁窗框内正要15 mL离心管，转至5 mL加压的基本上培育出基。

3. 从-80℃微波炉中的取出肝细胞。迅速将冷存管置于37℃水浴锅内，迅速摆动，使冷存液迅速冰。

特别注意: ① 冰过程不必摆动冷存管，前提冷存液冰均匀。摆动时不应不致水没过管盖增加废料危险性。

② 管内冷存液冰至只剩一个约2mm直径的冰晶时，可停止水浴。此后摆动冷存管至冰晶冰。

4. 用75%酒类消毒冷存管表面。在不洁窗框内小心开盖，尽量不致气泡溢出，轻柔吹打数次，移到至预先正要的离心管内。用少量基本上培育出基温水冷存管1~2次，一并得来至离心管内。

5. 250 g离心4 min。离心后去除上清代。转至2 mL基本上培育出基，轻柔吹打肝细胞盐类，适当落下、混匀。（如有台盼白可取少量肝细胞悬液进行颜料计算）

6. 将肝细胞不等哺育到1个T25培育出酒杯或底面积相当的培育出试管中的，转至必需要基本上培育出基，摇匀肝细胞，将培育出试管装入培育出箱中的培育出。

7. 消退次日，辨别肝细胞精神状态并换液，具体操作只见”肝细胞换液”。

特别注意: 贴壁/半贴壁肝细胞哺育24 h内不不应扰动。一小肝细胞贴壁较慢，消退后48 h不不应扰动，具体特别注意事项只见相不应肝细胞详述书。

肝细胞执行原则

· 严格的无菌周边环境。务必前提科学实验、超净台/有机体安全柜和培育出箱的清代洁。

· 规范的操作方式为。代为按照操作详述描述的方式为操作，特别注意操作细微。

· 并不需要要合适的、质量合理的实验耗材和路易斯酸。适用的路易斯酸不必经验证合理，利于肝细胞潮湿且批间差异性小。

著者：海胆有机体

市民号：海胆有机体科技 / 苏州海胆有机体

以上素材由海胆有机体（)提供

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